细菌涂片及细菌染色是微生物学的基本技术，也是观察细菌更简单且行之有效的方法，是微生物检测人员常用技能之一。通常情况下，由于细菌个体较小，较透明或半透明，如未经染色往往不以观察识别。因此借助于染色法可以使细菌着色，与视野背景形成鲜明对比，从而易于在显微镜下进行观察。

微生物检测常见的细菌染色方法包括简单染色、负染色、革兰氏染色、芽孢染色法、鞭毛染色、荚膜染色、死活染色。制备细菌染色片一般要经过涂片、固定、染色、水洗、干燥等步骤，然后用微仪显微镜观察。

1. 简单染色：

在实验室微生物检测过程中，不同细菌或者由于观察者所侧重观察的内容不同，所以使用的染料也有差异，但是简单细菌染色的方法是一样的。

先按照上述的制片方法制片，制成需要观察的玻片后，使用相对应的染料滴加到玻片上的菌膜区域，以覆盖菌膜为准。按照不同染料的要求，结合所观察的内容确定染色时间，染色时间到达时，进行水洗，干燥等步骤。更后得到的玻片加盖盖玻片即可进行镜检。如有需要可以后续再进行油封、蜡封等封片过程。简单细菌染色过程如下图：

2. 负染色

制备观察图片是非常容易的，但是对微生物检测初学者来说想要在玻片中找到目标菌还是有一定难度的，因为细菌常常无色透明且比较小，所以对初学者来说除非对光圈等进行很精细的调节，否则很难观察到目标菌，因此进行负染色就十分重要。该方法是将微生物与苯胺黑或者墨水混合，再将混合物覆盖于载玻片表面，由于这两种天然黑色染料不能渗入微生物细胞，所以使得透明的微生物个体在黑色的背景下很容易观察。负染色法常见有两种操作方法。

**种发个方法比较常见，在一个载玻片上将微生物与异地苯胺黑混合，用另外的载玻片将混合物均匀的覆盖于原来的载玻片上。该方法的目的是使混合物在在玻片上一边厚一边薄，在厚与薄中间的额区域就是更佳观察区域。如图所示：

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文章来源：环凯微生物